Základy mikroskopování

Příprava mikroskopických preparátů

Pro mikroskopování rostlinných objektů můžeme použít dočasné nebo trvalé preparáty. Ve cvičení pozorujeme dočasné preparáty, které si připravíme následujícím způsobem. Do středu očištěného podložního sklíčka naneseme kapátkem nebo pipetou kapku vody a do ní vložíme připravený preparát. Preparáty se nejčastěji připravují příčným řezem žiletkou.

Obrázek: Řezy používané v mikroskopické technice

Objekt ve vodě překryjeme krycím sklíčkem tak, že je nejdříve šikmo postavíme na hranu, posuneme ke kapce, která přilne k okraji sklíčka, zachytíme okraj špičkou preparační jehly a pak sklíčko zvolna spouštíme na kapku vody.

Obrázek: Příprava mikroskopického preparátu

Tento postup je nutno dodržovat proto, aby se v preparátu nevytvořily vzduchové bubliny, které ruší pozorování. Podle potřeby odsajeme přebytečnou vodu filtračním papírem nebo naopak přidáme malou kapku vody ke hraně krycího sklíčka, která se pod ně vsaje. Dostane-li se voda až na povrch krycího sklíčka, je nutné je osušit.

Postup při mikroskopování

Základní postavení mikroskopu je okulárovým tubusem k sobě, nastavený objektiv nejmenšího zvětšení, otevřená clona kondenzoru a zapnutá mikrolampa. U binokulárních mikroskopů je nutné si upravit rozteč obou okulárů podle vzdálenosti svých očí, aby splynul obraz preparátu. Sklíčka s preparátem připevníme na pracovní stolek a objekt umístíme do středu nad čočku kondenzoru. Pak přiblížíme šroubem kondenzoru stolek s preparátem do bezprostřední blízkosti objektivu, přičemž jejich vzdálenost kontrolujeme pohledem ze strany. Nyní je možné dívat se do okuláru a hrubým posunem vzdálenost objektivu od preparátu zvyšovat (otáčením makrošroubu směrem k sobě) až se preparát objeví v zorném poli. Nepodaří-li se obraz preparátu najít, je třeba postup znovu opakovat. Teprve potom preparát jemně doostříme posouváním mikrometrického šroubu a při současné manipulaci s clonou regulujeme intenzitu osvětlení. Po prohlédnutí, nejlepší část preparátu umístíme do středu zorného pole posunem stolku a obraz postupně zvětšujeme tím, že nastavíme objektiv většího zvětšení, zaostříme (stejným způsobem jako bylo popsáno výše) a upravíme osvětlení.

Barvení preparátu

Při barvení preparátu vitálními barvivy použité činidlo kápneme k okraji položeného krycího sklíčka a z druhé strany odsáváme vodu. Tím dojde k šetrnému prosátí barviva a následnému vybarvení sledovaných látek a struktur v preparátu.

Přehled používaných činidel a reakcí

Projasňování preparátu

Projasňování preparátu se provádí při sledování obsahu silnějších nebo lignifikovaných objektů. Pomocí projasňovacího média se upraví index lomu buněčných komponent a okolního média. Buněčný obsah zůstává zachován a je možné pozorovat, při různém zaostření, strukturu objektu v tzv. optických řezech. Materiál tedy není nutno řezat.